薄层扫描仪的两大范例及操纵
点击次数:1798 更新时候:2019-04-24
薄层扫描仪是对薄层色谱停止定量检测阐发的仪器,以后市场上有两类薄层色谱扫描仪:
传统扫描仪
是一种全波长扫描仪,供给波长200-800nm规模的可选波长,经由过程检测样品对光的接收强弱肯定物资含量。该扫描仪也能检测254nm或365nm紫外照耀发生的荧光强度,从而停止特同性检测。
传统扫描仪的扫描体例分为:单光束扫描、双光束扫描和双波长扫描。
单光束扫描:接纳单一光束(即单一波长扫描),其成果便是上图中一特定波长前提下的单条曲线。仪器布局简略,可是基线不稳,现实中很少操纵。
双光束扫描:接纳统一波长的两个光束同步扫描,一个光束扫描样品睁开通道,另外一个光束扫描样品通道中间的空缺地区,如许便可扣除空缺接收,局部消弭薄层板睁开标的目的铺板不平均发生的偏差。可是没法消弭垂至于睁开标的目的铺板不平均发生的偏差。
双波长扫描:两个差别波长的光束瓜代扫描样品睁开的通道地区,波长挑选时,一个波长为样品大接收地位,另外一是接收极小值地位。如上图所示,如检测方针为3(则大接收峰为290nm,极小值可选200nm、260nm或325nm)。这类体例可根基消弭铺板不均发生的偏差,是以扫描基线很不变。
以上各类扫描体例中,按照光源巨细(扫描精度)差别可分为直线扫描和锯齿扫描。
直线扫描:用能够笼盖样品睁开通道的宽光束一次性扫完全个睁开通道,即在睁开标的目的上(图中横坐标),每个点的数据只是一个扫描数据点。
锯齿扫描:接纳点状光源,光点尺寸小于通道宽度,是以在睁开标的目的挪动就任何一点时,光源都要逐点沿样品通道标的目的扫描,即构成“之”形(或锯齿形扫描)。如许,在睁开标的目的上每点的数据都是多个点扫描成果的累加值。锯齿扫描的精度绝对直线扫描较着进步。
以后,在定量阐发中,薄层扫描多接纳双波长锯齿扫描。
阐发偏差
薄层阐发的偏差包含三个方面:点样偏差、睁开偏差、定位偏差和检测偏差。
接纳主动点样器,偏差可控制在0.5%,谙练的阐发职员用毛细管点样,偏差小于1.0%,若用微量进样器,偏差会大一些。
睁开偏差来自铺板的平均性和样品睁开成果,若接纳预制的薄层板,偏差会较着下降,接纳双波长锯齿扫描,也能有用下降睁开偏差。
定位偏差值雀斑的地位和巨细鉴定,分散、脱尾等易发生定位偏差。检测偏差来自光源的不变性、光检测器的不变性和样品对光接收(或荧光发生)的线性度等方面。为削减这些偏差,须要很是紧密的电机体系,这也间接致使产物昂扬的价钱。
凡是环境下,薄层扫描阐发的偏差在3%以下。
薄层数码成像阐发仪
薄层数码成像阐发手艺是操纵数码成像装备取得薄层板上各点的光强度信息,以后对取得图象停止阐发的薄层阐发手艺。数码成像装备包含两种:拍照机和扫描仪(因为数码扫描仪接纳逐行成像手艺,为便于辨别传统薄层扫描仪的逐点扫描,将数码扫描仪称为逐行扫描仪)。
和传统薄层扫描一样,拍照机或逐行扫描仪都具备光检测体系,它们都是将光量线性转化为电信号的元件。差别的是,拍照机和逐行扫描仪可进一步将电信号转换成电脑图象,图象中单个点(像素)的色彩深浅反应了光的强弱。
是以,薄层数码成像更靠近人眼察看检测,成果更直观,是以很是合适辨别,出格是中药指纹图谱的辨认。
数码成像仪不只能实现通俗白光照耀下的成像阐发,再拆卸254nm或365nm紫外灯后,也能够检测特异荧光,特异荧光检测。