色谱柱的准确利用和掩护长短常主要的
点击次数:1921 更新时候:2019-10-18
色谱柱的准确利用和掩护非常主要,稍有不慎就会下降柱效、延长利用寿命乃至粉碎。在色谱操纵进程中,须要注重以下题目:
① 避免压力和温度的急剧变更及任何机器震撼。温度的俄然变更或使色谱柱从高处掉下城市影响柱内的添补状态;柱压的俄然下降或下降也会感动柱内填料,是以在调理流速时应当迟缓停止,在阀进样时阀的动弹不能过缓(如前所述)。
② 应逐步转变溶剂的构成,出格是反相色谱中,不应间接从无机溶剂转变为全数是水,反之亦然。
③ 普通说来色谱柱不能反冲,只要出产者指明该柱能够反冲时,才能够反冲撤除留在柱头的杂质。不然反冲会敏捷下降柱效。
④ 挑选利用适合的活动相(特别是pH),以避免牢固相被粉碎。偶然能够在进样器后面毗连一预柱,阐发柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,能够使活动相在进入阐发柱之前事后被硅胶“饱和”,避免阐发柱中的硅胶基质被消融。
⑤ 避免将基质庞杂的样品特别是生物样品间接注入柱内,须要对样品停止预处置或在进样器和色谱柱之间毗连一掩护柱。掩护柱普通是填有类似牢固相的短柱。掩护柱能够并且应当常常改换。
⑥ 常常常利用强溶剂冲刷色谱柱,断根保留在柱内的杂质。在停止洗濯时,对流路体系中活动相的置换应以相混溶的溶剂逐步过渡,每种活动相的体积应是柱体积的20倍摆布,即惯例阐发须要50~75ml。
⑦ 保管色谱柱时应将柱内布满乙腈或甲醇,柱讨论要拧紧,避免溶剂挥发枯燥。制止将缓冲溶液留在柱内静置留宿或更永劫候。
⑧ 色谱柱利用进程中,若是压力下降,一种能够是烧结滤片被梗塞,这时应改换滤片或将其掏出停止洗濯;另外一种能够是大份子进入柱内,使柱头被净化;若是柱效下降或色谱峰变形,则能够柱头呈现陷落,死体积增大。