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氨基柱的利用
点击次数:3195 更新时辰:2017-02-28

1.氨(an)基柱既就能正相灵活(🦄huo)运(yun)用,也就能反(fan)相灵活(huo)运(yun)用,而(er)是要遵循(xun)到(dao)的是:正相萃(cui)取剂(ji)和反(fan)相萃(cui)取剂(ji)一样可(ke)不互溶(rong)的,一样环(huan)(huan)镜新氨(an)基柱保证在正相环(huan)(huan)镜中,个比方(fang)LUNA 氨基柱保管在正己烷-乙腈(99:1)中。
   2. 正相利用
   2.1 新柱子可间接用活动相。保举先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再按照活动相选用极性附近的二氯甲烷以不异的流速冲10倍柱体积,zui后换成活动相。
   2.2 正相利用时,不宜阐发含醛基、羰基的化合物,不可用于复原糖的阐发;活动相要*脱气,并不得含有羰基化合物和过氧化物(品质不好的四氢呋喃含有少量)。
   2.3 任什么时辰候改换活动相时都要确保新活动相与柱子原保管液可互溶。
   3 反相利用
   3.1 先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积,再顺次以不异的流速不异的用量用异丙醇、甲醇、甲醇-水(50:50)冲柱子。
   3.2 以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的(LUNA)水溶液冲柱子(注重pH值切不可跨越11.0),当即用水(0.5ml/min的流速,30倍柱体积)冲刷,再换成活动相。
   3.3 配制活动相时,应各组分别离量取,比例较小的组分要紧密量取,需调pH值时要紧密到0.1。
   3.4 反相前提下利用时,要出格注重节制pH值规模,pH值越低越有产生水解的风险,活动相中水的比例越高固然也越有产生水解的风险。的pH规模在pH 3.0-7.0
   3.5 若是要利用的活动相中还含有缓冲盐类,倡议在用阐发活动相之前,先用不含缓冲盐的同比例活动相过渡,如许可防止缓冲盐在阐发柱内的析出。
   3.6 有一种环境是,当利用氨基柱停止酸性物资的阐发时,酸性物资的存在象征着质子的存在,能够会使略带负电荷的氨基官能团质子化,致使利用一段时辰后对某些类的阐发物保留性子有所转变或表现在柱效降落。倡议:用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲刷该柱(冲刷后固然要再用不含碱的活动相洗去过剩氨),以后再停止阐发这类酸性阐发物时倡议在活动相中稍微增加少量氨如0.1%。
  4 色谱柱的冲刷:简略提及来,正相前提下利用的氨基柱就参照硅胶柱的洗濯体例;反相前提下利用的氨基柱就参照C18的洗濯体例。
  5 色谱柱的保管
  5.1 正相利用时,将柱子冲刷清洁后,用正己烷-乙腈(99:1)保管。
  5.2 反相利用时,如短时候不必,可用甲醇或乙腈保管;持久不必时需将甲醇顺次用异丙醇置换,zui后用正己烷保管。
  6 色谱柱的再生
  6.1 计划1:顺次用甲醇、异丙醇、正己烷、异丙醇、甲醇冲柱子(各以0.5ml/min的流速,20倍柱体积),再换活动相。这些洗濯体例,首要是针对当样品中有杂质慢慢吸附积累到填料上时的处置体例,色谱柱表现行动为诸如柱压增高柱效降落等。
  6.2 计划2:NH2柱用于反相前提时,NH2键会水解,特别是在该柱子pH规模之外,在酸性和碱性前提下柱寿命会降落很快,若是在这个前提下利用须要洗濯一下,须要用10倍柱体积溶液冲刷,以下:
      95%水/5%乙腈
      THF四氢呋喃
      95%乙腈/5%水
      并坚持95%乙腈/5%水持续冲刷,以低流速0.2-0.5mL/min冲刷。
  6.3 计划3:柱子利用必然时辰后,柱效降落,老化,也可洗濯一下柱子规复柱机能,洗濯时顺次用10倍柱体积的以下溶液冲刷:
      95%水/5%乙腈
      THF四氢呋喃
      95%乙腈/5%水
再走活动相便可