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色谱柱罕见操纵保护
一、准确利用缓冲盐
缓冲盐凡是易溶于水,难溶于无机溶剂,是以缓冲盐利用不妥会使其析出,梗塞填料基质上的微孔和颗粒间的空地,使填料板结,柱压回升;同时障碍了基质上键合的碳链自在伸展,使色谱柱的保留才能降落,柱效降落。缓冲盐析出后,去除很是坚苦,是以,准确的利用缓冲盐对耽误色谱柱利用寿命很是主要。
准确利用缓冲盐的方针是避免缓冲盐析出,是以准确利用缓冲盐的体例可归结为一句话:利用前要过滤,利用后冲要洗。详细体例以下:
1、等度前提:利用缓冲盐前和利用后需用过渡活动相以1.0ml/min流速冲刷60min;利用后去除缓冲盐的另外一个体例是用过渡活动相以0.2ml/min流速冲刷色谱柱。
2、梯度前提:用含有缓冲盐的活动相跑梯度之前,用与初始活动相构成不异的过渡活动相以1.0ml/min流速冲刷60min,再用该过渡活动相以1.0ml/min冲刷色谱柱120min。含缓冲盐活动相的梯度设定应尽量陡峭,以避免梯度进程中缓冲盐析出。
注重:过渡活动相是指无机相和水相的构成与阐发活动相不异,区分只是过渡活动相不含缓冲盐。
3、缓冲盐析出的弥补体例:
1)计划1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度前提下反向冲刷色谱柱120min
2)计划(hua)2:用甲醇(chꦡun)/水=20/80以0.2ml/min流速反(fan)向(xiang)🎶冲刷色谱柱。
二、避免强保留物资在色谱柱上存留
强保留物资和大份子化合物在色谱柱中积累,对样品中的化合物发生额定的保留行动,不只引发峰型变宽、拖尾,使柱效降落,同时也会引发保留时候的变更,积累到必然水平时还会致使柱压降低。因为强保留物资和大份子化合物对色谱分手的影响是一个积累效应,须要必然的时候才会表现出来,但对很多药品出格是庞杂样品而言,很难判定其是不是是含有强保留物资,是以要避免强保留物资的积累,须要在天天的平常保护顶用纯甲醇或乙氰洗濯色谱柱。 clin-lab.com
洗濯体例:
1、未利用缓冲盐:天天阐发实现后,先用上述体例撤除缓冲盐,而后再用甲醇或乙氰反向冲刷色谱柱60min。
2、利用过缓冲盐:阐发实现后,先用上述体例撤除缓冲盐,而后在用纯甲醇或乙氰反向冲刷色谱柱60min
3、弥补体例:
水——乙氰——氯仿(或异丙醇)——乙氰——水
每步以1.0ml/min流速反向冲刷色谱柱60min。